問(wèn)題1：RNA 降解

可能原因：1）無(wú)核酸酶的環(huán)境被破壞

2）體外轉錄的RNA探針降解

解決辦法：1）清洗和使用新開(kāi)的離心管和試劑等

2）RNA探針合成后，電泳檢測其長(cháng)度和濃度

問(wèn)題2：RNA結合蛋白的親和力不夠：

可能原因：1）結合緩沖環(huán)境沒(méi)有優(yōu)化

2）裂解不完全

3）磁珠用量不足

4）RNA探針用量不足

解決辦法：1）優(yōu)化孵育時(shí)間、溫度 、鹽濃度等條件

2）增加裂解液和蛋白上樣量的比例

3）增加裂解液

4）增加磁珠用量

5）增加探針用量

6）確定生物素和鏈霉親和素效率

問(wèn)題3：RNA結合蛋白沒(méi)有結合

可能原因：1）靶蛋白量不足

2）緩沖體系不對

3）RNA探針和蛋白的親和力本來(lái)就低

解決辦法：1）增加上樣蛋白量

2）應用低鹽體系

3）加入交聯(lián)試劑

問(wèn)題4：結合的非特異性高

可能原因：1）緩沖環(huán)境沒(méi)有優(yōu)化

2）緩沖環(huán)境嚴謹性低

3）樣品沒(méi)有裂解完全和裂解體系沒(méi)有優(yōu)化

解決方法：1）優(yōu)化孵育時(shí)間溫度 鹽濃度等條件

2）使用嚴謹性高的緩沖體系

3）調低RNA探針和樣品的比例

4）提高裂解液的量

問(wèn)題5：WB信噪比高

可能原因：1）陽(yáng)性信號率低

2）一抗效率低

3）蛋白沒(méi)有充分溶解

解決方法：1）增加二抗的量

2）用敏感度的化學(xué)發(fā)光液

3）用細胞裂解液預孵一抗

4）增加樣品的量

5）確定有沒(méi)有其他可能的結合情況

6）增加裂解液用量

• 1 . miRNA的概述
  • 1.1. miRNA的生物發(fā)生
  • 1.2. miRNA的作用機制
  • 1.3. miRNA的研究展望
  • 1.4. miRNA與癌癥
  • 1.5. miRNA在轉化醫學(xué)中的應用
• 2 . lncRNA的概述
  • 2.1. lncRNA的研究背景
  • 2.2. lncRNA的作用機制
  • 2.3. lncRNA的研究展望
  • 2.4. lncRNA與癌癥
  • 2.5. lncRNA與臨床疾病
• 3 . miRNA與lncRNA研究策略
  • 3.1. miRNA的一般研究策略
  • 3.2. AGO2在miRNA研究中的應用
  • 3.3. LncRNA的一般研究策略
  • 3.4. miRNA與lncRNA的生物信息學(xué)預測
• 4 . miRNA與lncRNA研究實(shí)驗
  • 4.1. RNA 結合蛋白免疫沉淀技術(shù)（RIP）Model Figures
  • 4.2. RNA結合蛋白免疫沉淀技術(shù)（RIP）實(shí)驗流程
  • 4.3. RNA結合蛋白免疫沉淀技術(shù)（RIP）實(shí)驗常見(jiàn)問(wèn)題
  • 4.4. RNA pull - down Model Figures
  • 4.5. RNA pull- down實(shí)驗流程
  • 4.6. RNA pull- down實(shí)驗常見(jiàn)問(wèn)題
  • 4.7. 熒光素酶檢測技術(shù)（Luciferase）Model Figures
  • 4.8. 熒光素酶檢測技術(shù)（Luciferase）實(shí)驗流程
  • 4.9. 熒光素酶檢測技術(shù)（Luciferase）實(shí)驗常見(jiàn)問(wèn)題