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熒光素酶檢測技術(shù)(Luciferase)Model Figures
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實(shí)驗技術(shù)流程
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實(shí)驗常見(jiàn)問(wèn)題
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結果分析
在分析轉錄調控作用位點(diǎn)時(shí),一般先采取Luciferase片段缺失實(shí)驗初步分析,確定目標調控因子是否調控目標基因的轉錄及大概的作用區域。對縮小范圍的區域進(jìn)行生物信息學(xué)預測可能位點(diǎn)后,采用Luciferase定點(diǎn)突變實(shí)驗確定真正的轉錄調控位點(diǎn)。標準結果及結論如下所示:
1 Luciferase片段缺失實(shí)驗
經(jīng)檢測發(fā)現多次裁切對熒光素酶表達量產(chǎn)生的影響相同(即檢測組與空白組有明顯差異,但各裁切的檢測組間沒(méi)有明顯差異),故可推斷轉錄調控位點(diǎn)應位于-282~近啟動(dòng)子端區域。
2 Luciferase定點(diǎn)突變實(shí)驗
對不同位點(diǎn)(生物信息學(xué)預測)分別進(jìn)行點(diǎn)突變,LXRE2位點(diǎn)突變后的檢測組與野生型的檢測組間存在明顯差異,而LXRE1位點(diǎn)突變后的檢測組與野生型的檢測組間沒(méi)有明顯差異,故可推斷轉錄調控位點(diǎn)應為LXRE2。
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