技術(shù)服務(wù)描述

轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質(zhì)分子，也稱(chēng)為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動(dòng)子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱(chēng)為順式因子，轉錄因子的DNA結合域和順式因子實(shí)現共價(jià)結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。螢光素酶報告基因實(shí)驗（luciferase Assay）是檢測這類(lèi)轉錄因子和其靶啟動(dòng)子中的特異順序結合的重要手段，其原理簡(jiǎn)述如下：（1）用靶啟動(dòng)子的特定片段替換報告基因質(zhì)粒（如pGL3-basic）的啟動(dòng)子區。（2） 將要檢測的轉錄因子表達質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉。如果該轉錄因子能夠激活靶啟動(dòng)子，則螢光素酶就會(huì )表達，且其表達量與轉錄因子的作用強度成正比。（3） 加入特定的底物，螢光素酶與底物反應，產(chǎn)生螢光素，檢測熒光的強度可以對螢光素酶的活性定量，進(jìn)而判斷該轉錄因子能否與靶啟動(dòng)子片段發(fā)生作用 （及其作用強度）。

Promoter活性Luciferase實(shí)驗常用載體——pGL3

Promoter片段缺失Luciferase分析

PCR擴增Luciferase點(diǎn)突變靶基因

服務(wù)流程

1. PCR擴增靶基因的Promoter，或直接合成結合位點(diǎn)序列；

2. 片段裁切或點(diǎn)突變設計靶基因的Promoter并以PCR擴增，或直接合成序列；

3. 將上述不同DNA片段分別克隆至報告載體pGL4質(zhì)粒；

4. 將報告載體轉染待檢細胞；

5. 多功能酶標儀檢測報告基因的表達水平。

客戶(hù)提供

1. 目的基因、目的miRNA的相關(guān)信息；

2. 目的miRNA的模擬物（mimic）或抑制物（inhibitor）；

3. 作克隆模板用途的細胞或組織樣品；

4. 需轉染并作最后檢測用途的細胞樣品。

賽誠提供

1. 原始數據、結果圖片；

2. 標準實(shí)驗報告；

3. SCI標準Result Figure。