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項目名稱(chēng):Luciferase(啟動(dòng)子活性驗證)
所屬分類(lèi):Lucifefase實(shí)驗
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技術(shù)服務(wù)描述
轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質(zhì)分子,也稱(chēng)為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動(dòng)子中的特異序列結合,這些特異性的序列被稱(chēng)為順式因子,轉錄因子的DNA結合域和順式因子實(shí)現共價(jià)結合,從而對基因的表達起抑制或增強的作用。螢光素酶報告基因實(shí)驗(luciferase Assay)是檢測這類(lèi)轉錄因子和其靶啟動(dòng)子中的特異順序結合的重要手段,其原理簡(jiǎn)述如下:(1)用靶啟動(dòng)子的特定片段替換報告基因質(zhì)粒(如pGL3-basic)的啟動(dòng)子區。(2) 將要檢測的轉錄因子表達質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉。如果該轉錄因子能夠激活靶啟動(dòng)子,則螢光素酶就會(huì )表達,且其表達量與轉錄因子的作用強度成正比。(3) 加入特定的底物,螢光素酶與底物反應,產(chǎn)生螢光素,檢測熒光的強度可以對螢光素酶的活性定量,進(jìn)而判斷該轉錄因子能否與靶啟動(dòng)子片段發(fā)生作用 (及其作用強度)。
Promoter活性Luciferase實(shí)驗常用載體——pGL3
Promoter片段缺失Luciferase分析
PCR擴增Luciferase點(diǎn)突變靶基因
服務(wù)流程
1. PCR擴增靶基因的Promoter,或直接合成結合位點(diǎn)序列;
2. 片段裁切或點(diǎn)突變設計靶基因的Promoter并以PCR擴增,或直接合成序列;
3. 將上述不同DNA片段分別克隆至報告載體pGL4質(zhì)粒;
4. 將報告載體轉染待檢細胞;
5. 多功能酶標儀檢測報告基因的表達水平。
客戶(hù)提供
1. 目的基因、目的miRNA的相關(guān)信息;
2. 目的miRNA的模擬物(mimic)或抑制物(inhibitor);
3. 作克隆模板用途的細胞或組織樣品;
4. 需轉染并作最后檢測用途的細胞樣品。
賽誠提供
1. 原始數據、結果圖片;
2. 標準實(shí)驗報告;
3. SCI標準Result Figure。