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廣州賽誠生物科技有限公司
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QQ:386244141

項目名稱(chēng):Luciferase(3’UTR活性驗證)

所屬分類(lèi):Lucifefase實(shí)驗

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技術(shù)服務(wù)描述

螢光素酶是理想的報告基因,因為哺乳動(dòng)物細胞中不含內源性螢光素酶,一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單報告基因實(shí)驗往往會(huì )受到各種實(shí)驗條件的影響,而雙報告基因則通過(guò)共轉染的“對照”作為內參為實(shí)驗提供一基準線(xiàn),從而可以在最大程度上減小細胞活性和轉染效率等外在因素對實(shí)驗的影響,使得數據結果更為可信。Dual-Luciferase雙螢光素酶報告基因檢測系統在細胞中同時(shí)表達螢火蟲(chóng)螢光素酶和海腎螢光素酶,兩者沒(méi)有種源同源性并對應不同的反應底物,故而沒(méi)有交叉干擾。得益于超強的光信號和超高的信噪比,本系統被廣泛用于miRNA靶基因驗證。

由于miRNA主要通過(guò)作用于靶基因的3’UTR起作用,可以將目的基因3’UTR區域構建至載體中報告基因luciferase的后面, 通過(guò)比較過(guò)表達或者干擾miRNA后,報告基因表達的改變(監測螢光素酶的活性變化)可以定量反映miRNA對目的基因的抑制作用;結合定點(diǎn)突變等方法進(jìn)一步確定miRNA與靶基因3’UTR的作用位點(diǎn)。

 

 6.1 miRNA靶基因Luciferase實(shí)驗常用載體——psiCHECK2.png

miRNA靶基因Luciferase實(shí)驗常用載體——psiCHECK2

 

6.2 PCR擴增Luciferase點(diǎn)突變靶基因.png

PCR擴增Luciferase點(diǎn)突變靶基因

 

服務(wù)流程

1. PCR擴增靶基因的3’-UTRWT),或直接合成結合位點(diǎn)序列;

2. 點(diǎn)突變設計靶基因的3’-UTRMUT)并以PCR擴增,或直接合成序列;

3. 將上述兩種DNA片段分別克隆至報告載體psiCHECK2質(zhì)粒;

4. 將報告載體與模擬物(mimic)或抑制物(inhibitor)共轉染待檢細胞;

5. 多功能酶標儀檢測報告基因的表達水平。

 

客戶(hù)提供

1. 目的基因、目的miRNA的相關(guān)信息;

2. 目的miRNA的模擬物(mimic)或抑制物(inhibitor);

3. 作克隆模板用途的細胞或組織樣品;

4. 需轉染并作最后檢測用途的細胞樣品。

 

賽誠提供

1. 原始數據、結果圖片;

2. 標準實(shí)驗報告;

3. SCI標準Result Figure。


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