CRISPR-dCas9系統

 dCas9蛋白是Cas9蛋白的突變體，即Cas9內切酶的RuvC1和 HNH兩個(gè)核酸酶活性區域同時(shí)發(fā)生突變。因此，dCas9蛋白的內切酶活性全部消失，只保留由gRNA引導進(jìn)入基因組的能力。

    CRISPR-dCas9系統提供了一個(gè)研究定點(diǎn)轉錄調控的平臺。在這個(gè)平臺中，dCas9主要是與其他效應蛋白融合（如GFP、轉錄因子、組蛋白修飾等），進(jìn)行基因調控，基因組成像，染色質(zhì)或DNA修飾以及染色質(zhì)免疫沉淀等。

Figure 8 ： The Cas9 null mutant has lost both of its DNA cleavage domains while still retaining its ability to target genomic loci through gRNA:DNA interactions. By fusing effector domains to the Cas9 null mutant, it is possible to activate gene expression (i.e. V964 or NF-kB), repress gene expression (i.e. KRBA domain), visualize genomic loci (i.e. EGFP), perform chromatin remodelling (i.e. TET proteins), and simplify chromatin immunopercipitation (through an antibody epitope tag)

• 1 . CRISPR-Cas9系統
  • 1.1. CRISPR-Cas9組成
  • 1.2. 作用機制
  • 1.3. 不同的Cas9系統
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系統
• 2 . CRSPER- dCas9系統
  • 2.1. dCas9-轉錄調控系統
  • 2.2. dCas9-基因激活與抑制系統
  • 2.3. dcas9-表觀(guān)遺傳系統
• 3 . dCas9技術(shù)路線(xiàn)
  • 3.1. gRNA設計
  • 3.2. dCas9實(shí)驗流程
  • 3.3. 實(shí)驗問(wèn)題與解決方案